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    猴结核分枝杆菌抗体IgGELISA试剂盒使用说明书

    • 所属分类:其它资料

      上传时间:2017/10/17

    • 文件类型:jpg

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    • 上传公司:上海谷研实业有限公司进入展台
    • 标签:试剂盒  

    资料简介

    实验原理

    本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猴结核分枝杆菌抗体 IgG(M.tuberculosis-IgG)表达。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中结核分枝杆菌抗体IgG(M.tuberculosis-IgG)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与 CUTOFF 值相比较,从而判定标本中猴结核分枝杆菌抗体
    IgG(M.tuberculosis-IgG)的存在与否。

    试剂盒组成

    1
    30 倍浓缩洗涤液
    20ml×1 瓶
    7
    终止液
    6ml×1 瓶

    2
    酶标试剂
    6ml×1 瓶
    8
    阳性对照
    0.5ml×1 瓶

    3
    酶标包被板
    12 孔×8 条
    9
    阴性对照
    0.5ml×1 瓶

    4
    样品稀释液
    6ml×1 瓶
    10
    说明书
    1 份

    5
    显色剂 A 液
    6ml×1 瓶
    11
    封板膜
    2 张

    6
    显色剂 B 液
    6ml×1/瓶
    12
    密封袋
    1 个

    标本要求

    1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

    马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步骤

    编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

    加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

    温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

    配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

    洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。


    加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

    温育:操作同 3。

    洗涤:操作同 5。

    显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

    15 分钟.

    终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。


    操作程序总结:

    计算和结果判定:

    试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

    阴 性 判 定 : 样 品 OD 值 < 临 界 值 ( CUT OFF ) 者 为 结 核 分 枝 杆 菌 抗 体

    IgG(M.tuberculosis-IgG)阴性阳 性 判 定 : 样 品 OD 值 ≥ 临 界 值 ( CUT OFF ) 者 为 结 核 分 枝 杆 菌 抗 体


    IgG(M.tuberculosis-IgG)阳性。

    注意事项

    1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

    2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

    用完,板条应装入密封袋中保存。3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    5.底物请避光保存。

    6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm

    7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须注意安全。

    保存条件及有效期

    1.试剂盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6 个月

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